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膠原蛋白的提取方法
更新時間:2011-04-13 點擊次數:12437

膠原蛋白的提取方法
   膠原蛋白的提取與純化的目標是盡量使膠原提取的產率、純度更高,并且使所提取的膠原能滿足不同領域的要求。迄今為止,膠原的提取方法主要有以下4種:酸法、堿法、鹽法、酶法。在實際提取過程中,不同提取方法之間往往相互結合,以取得較好的提取效果。
1、酸法提取
酸法提取主要采用低離子濃度酸性條件浸漬處理原料,從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿,而引起纖維膨脹、溶解。作為溶劑使用的酸,主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法,用酸法提取的膠原zui大程度地保持了其三股螺旋結構。此法處理快速,所得產品的分子量是連續的,適用于醫用生物材
料及原料的制備,但產品得率低,設備腐蝕嚴重,污染重。趙蒼碧等[2]采用0.3 %的醋酸溶液在4 ℃下從牛腱中提取膠原蛋白,得到高純度的膠原蛋白溶液。余海等[3]采用0.5 mol/L的醋酸溶液在4 ℃下從鼠尾肌腱膠成功提取出I型膠原蛋白。Takeshi等[4]膠原蛋白課題組
采用0.5 mol/L的醋酸溶液從海妒魚、鰭魚、金槍魚、水母等的皮中提取、分離出純度較高的膠原蛋白,并對所提取的膠原蛋白的理化性質作了系統的研究。
2、堿法提取
堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1 %~1.5 %石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解,因此得到的水解產物分子量比較低。所以,若想保留膠原的三股螺旋結構,此法不可取。
3、鹽法提取
鹽法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下,當鹽的濃度達到一定量時,膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對提取的膠原蛋白進行鹽析處理,可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。
4、酶法提取
酶法提取是利用蛋白酶使膠原溶解,水解條件溫和,反應速率快,提取的膠原蛋白仍有完整的三股螺旋結構,蛋白純度高,理化性質穩定,且無環境污染。酶法提取常用的蛋白酶有:胃蛋白酶、胰蛋白酶或者復合酶。工藝可選擇一步法,即利用酶液直接提取;二步法,即先用酸或者堿進行初步提取,然后再用酶提取。Langmaier等[6]用MgO預處理革屑,然后用堿性蛋白酶提取膠原的水解產物。Cabeza L.F.T等[7]先用胃蛋白酶,再用堿性蛋白酶提取了2種不同的膠原水解產物。趙蒼碧等[2]采用胃蛋白酶和無花果蛋白酶消化法從牛腱中提取膠原蛋白,探討了酶和酶的加入量對提取結果的影響,給出了酶對膠原提取*工藝配比,酶與牛腱的質量比為0.1時效果*,而使用無花果蛋白酶時,0.01的配比*。

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