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『討論』如何選擇BIM試劑盒*包被條件?
更新時(shí)間:2016-11-23 點(diǎn)擊次數(shù):812

   一般在ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過程中,我們會(huì)考慮的包被條件有包被抗原、包被液、包被溫度、包被濃度,那么我們應(yīng)該如何選擇BIM試劑盒*的包被條件呢?讓我們一起來看看。

 

1.包被抗原的選擇:
   包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被,對于含雜質(zhì)較多的抗原可以采用間接捕獲法包被(先用能夠與目的抗原反應(yīng)的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標(biāo)板上,再通過特異性反應(yīng)使抗原固相化)。ELISA試劑盒經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板,小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,由于分子量太小,往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上,一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上。


2.包被液的選擇:
   一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。


3.包被溫度的選擇:
   通常是4-8度條件下過一夜或者37度保溫2小時(shí),我們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的保持。


4.包被濃度的選擇:
   包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)變化,一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要明確針對特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實(shí)驗(yàn)來確定。

 

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